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什么是弱极性色谱柱的“保留时间”?

   弱极性色谱柱在反相色谱中用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
  样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份先被冲洗出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。
  随着色谱柱的保护柱长度加长,样品的保留时间会比使用短保护柱长。一般来说,保护柱的内径与分析色谱柱的内径相同或相当即可。保留时间的变化指两种类型的情况,一种是同一根柱样品间的保留变化,第二种类型主要是填料的差异造成的,许多实验都会碰到。
  不同牌号的色谱柱分离的色谱峰保留时间可在小范围内移动,但峰的顺序和分辨率不变,可改变流速或溶剂强度(反相色谱加水调节)进行校正。如果谱图中色谱顺序发生了变化,或者两峰重叠在一起,问题就比较严重。保留时间发生大的变化,主要由柱填料硅酸相互作用所致,另外有次级保留因素的影响。硅胶为基质的填料表面含有硅醇,有的封尾填料可部分去掉硅醇、不封尾填料的硅胶表面硅醇基更多。酸性或碱性分子可与硅醇发生不同程度的相互作用。硅酸与样品分子作用的强弱,因不同批号的硅胶和不键合相填料而异。即使同批号的硅胶而不同批号的键合相也有差异。硅醇对阳离子或碱性样品影响大。
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